При разработке пилотной технологии производства церулоплазмина из фракции III+IV, полученной спиртовым методом Кона, показано, что применение метода хроматографии в расширенном слое сорбента обеспечивает значительную экономию времени благодаря тому, что удается избежать нескольких стадий фильтрования и центрифугирования.
Показано, что один хроматографический шаг даже при использовании современных хроматографических сорбентов не может обеспечить необходимую очистку церулоплазмина от примесей, в состав которых входят металопротеиназы, которые впоследствии дестабилизируют и разрушают целевой белок.
Уровня фармакологической чистоты церулоплазмина с проведением необходимых мероприятий по вирус-инактивации удается достичь тремя этапами хроматографической очистки церулоплазмина: АРС-хроматографией на Stremline Q XL, ГВХ на Phenyl Sepharose HP и ИРХ на Superdex 200. Три хроматографических этапа и использование метода растворитель-детергент на втором хроматографическом этапе в собственной модификации автором обеспечивает возможность вирус-инактивации оболочечных вирусов >6,4 и безоболочечных вирусов >4,7 log титра вирусных частиц, соответственно.

Список ссылок

1.    Brummelhuis H.G.J Methods of Plasma Protein Fractionation / Ed. Curling J.M. --- London, UK: Academic Press, 1980. P. 117-128.
2.    Barthels C.R., Kleinman G., Korzon N.J., Irish D.B. / Chem.Eng.Prog. 1958. V. 54. P. 49-52.
3.    Belter P.A., Cunningham F.L., Chen J.W. / Biotechnol. Bioeng. 1973. V. 15. P. 533-549.
4.    Gailliot F.P., Gleason C., Wilson J.J., Zwarick J. / Biotechnol. Prog. 1990. V. 6. P. 370-375.
5.    Buijs A., Wesselingh J.A. / J. Chromatogr. 1980. V. 201. P. 319-327.
6.    Burns M.A., Graves D.J. / Biotechnol. Prog. 1985. V. 1. P. 95-103.
7.    Nixon L., Koval C.A., Xu L., Noble R.D., Slaff G.S. / Bioseparations. 1991. V. 2. P. 217-230.
8.    Draeger M.N., Chase H.A./ I. Chem. Eng. Symp. 1990. V. 118, 12.1-12.12.
9.    Draeger M.N., Chase H.A. / Bioseparations. 1991. V. 2. P. 67-80.
10.    Chase H.A., Draeger M.N. / J. Chromatogr. 1992. V. 597. P. 129-145.
11.    Chase H.A., Draeger M.N. / Separation Sci. Technol. 1992. V. 27. P. 2021-2039.
12.    Hedman P., Barnfield Frej A.-K. / Adapting Chromatography for Initial Large-Scale Protein Recovery. ACS Conf. Proceed. Ser., Harnessing Biotechnology for the 21st Century. Eds.: Ladisch M., Bose A. 1992. P. 271-274.
13.    Wnukowski P., Lindgren A. / Characterization of the Internal Flow Hydrodynamics in an Expanded Bed Adsorption Column. Recovery of Biological Products VI. Engineering Foundation. --- Switzerland: Interlaken, 1992.
14.    Barnfield Frej A.-K., Johansson S., Hjorth R./ Recovery of a Recombinant Protein from an E. coli Homogenate using Expanded Bed Adsorption. Recovery of Biological Products VI. Engineering Foundation. --- Switzerland: Interlaken, 1992.
15.    Johansson B.U., Wnukowski P. / Hydrodynamic Stability of the Liquid Fluidized Bed of Small Particles: An Experimental Study. AIChE Annual Meeting. --- Florida, USA, 1992. P. 116.
16.    McCormick D.K. / BioTechnol. 1993. V. 11. P. 1059.
17.    Schmidt C. / Expanded Bed Adsorption - A New Way for Industrial Recovery of Recombinant Proteins. New Zealand Biotech Association Meeting. --- Palmerston North, New Zealand, 1993.
18.    Kämpe S., Barnfield Frej A.-K./ Purification of Proteins from Crude Feedstock using Streamline Expanded Bed Adsorption. XIII Int. Symp.on HPLC of Proteins, Peptides and Polynucleotides. --- San Francisco, USA, 1993.
19.    Hjorth R., Kämpe S., Carlsson M. / Bioseparation. 1995. V. 5. P. 217-223.
20.    Chang Y.-K., Chase H.A. / Biotech. Bioeng. 1996. V. 49. P. 512-526.
21.    Batt B.C., Yabannavar V.M., Singh, V. / Bioseparations. 1995. V. 5. P. 41-52.
22.    Schmidt C., Berglöf J. H., Lundquist L.-O. / Impact of Improved Chromatographic Media on Productivity and Process Design in Downstream Processing. 12th Meeting of European Animal Cell Technology. --- Würtzburg, Germany, 1993.
23.    Волков Г.Л., Андрианов С.И., Гаврилюк Е.С., Горошникова Т.В. / Укр.биохим.ж. 2004. Т. 76(1). С. 5-16
24.    Волков Г.Л. Андрианов С.И., Гаврилюк Е.С., Горошникова Т.В. / Укр.биохим.ж. 2004. Т. 76(2). С. 20-30.
25.    Волков Г.Л. Андрианов С.И., Гаврилюк Е.С., Горошникова Т.В., Сломинский А.Ю. / Укр.биохим.ж. 2005. Т. 77(2). С. 26-57.
26.    Бердинских Н.К., Курищук К.В., Лялюшко Н.М., РадскаЯ Л.С. Церулоплазмин: функции в организме, фармакологические свойства и использование в клинической практике. --- Киев: Просвита, 2001. --- 48 с.
27.    Эделеева Р.В., Якубовская Р.И., Осипова Н.А., Сергеева Т.В. Коррекция клеточного метаболизма у онкологических больных в послеоперационном периоде препаратами фнтиоксидантного действия. Пособие для врачей. ---. М.: МНИОИ им. П.А. Герцена, 2003. --- 20 с.
28.    Sontakke A.N., More U. / Indian J. Clin. Biochem. 2004. V. 19(1). P. 102-104.
29.    Соколова Е. / Зеркало недели. 2007. № 5(634).
30.    Volkov G.L., Andrianov S.I., Havrylyuk O.S., Goroshnikova T.V., Kurischuk K.V., Radska L.S. Three steps purified plasma ceruloplasmin – a first technology for blood proteins virus inactivation in Ukraine. Plasma product biotechnology meeting. --- Netherland Antilles, Curacao, 2003. P. 71.
31.    Volkov G.L., Andrianov S.I., Havrylyuk O.S., Goroshnikova T.V. / Укр.биохим.ж. 2002. Т. 74 (4А, дополнение 2). С. 176-177.
32.    Kridel S.J., Chen E., Kotra L.P., Howard E.W., Mobashery S., Smith J.W. / J. Biol. Chem. 2001. V. 276(23). P. 20572-20578.
33.    Chen E.I., Kridel S.J., Howard E.W., Li W., Godzik A., Smith J.W. / J. Biol. Chem. 2002. V.  277(6). P. 4485-4491.
34.    Streamline Q XL. Streamline SP XL. Instruction. Pharmacia Biotech. 1997. 20 P.  http:/search.babylon.com/home?q=Streamline+Q+XL&babsrc=home&s=web
35.    Kim G., Park S.Y. / FEBS Letters. 1998. V. 437(3). P. 293-296.