Ферментативный гидролиз предварительно цитраконилированного рекомбинантного предшественника человеческого инсулина

Аннотация

В настоящее время человеческий инсулин в основном получают из рекомбинантного предшественника, синтезируемого тем или иным штамм-продуцентом. В ходе ферментативного расщепления предшественника с помощью трипсина и карбоксипептидазы В образуется инсулин, загрязненный рядом примесей, о природы которых зависит сложность последующей технологии очистки. Одной из наиболее трудноотделяемых примесей является (В30)-дезтреонининсулин. В данной работе описан метод предварительной обратимой модификации белка-предшественника с помощью цитраконового ангидрида, которая позволяет предотвратить побочное образование (В30)-дезтреонининсулина. После проведения гидролиза с инсулина снимают цитраконовую защиту с помощью понижения рН ледяной уксусной кислотой. Метод позволяет получить высокоочищенный инсулин, практически полностью лишенный (В30)-дезтреонининсулина.

Список ссылок

1. Banting F.G., Best C.H. / J. Lab. Clin. Med. 1922. V.7. P.251-266.
2. Степанов В.М. / Молекулярная биология. Структура и функции белков. – М.: Высшая школа, 1996. 182 с.
3. Древаль А.В. / Массовая Инсулинофобия. – М.: Профессионал-центр, 2003. 160 с.
4. Clark A.J., Adeniyi-Jones R.O., Knight G., Leiper J.M., Wiles P.G., Jones R.H., Keen H., MacCuish A.C., Ward J.D., Watkins P.J., Cauldwell J.M., Glynne A., Scotton J.B. / Lancet. 1982. V.2 (8294). P.354-357.
5. Petrides D., Sapidou E., Calandranis J. / Biotechnol. Bioeng. 1995. V.48. P.529-541.
6. Гусаров Д.А. / Разработка эффективной технологии получения фармацевтических препаратов генно-инженерного инсулина и его аналогов. Дисс.канд.наук, МИТХТ им.М.В.Ломоносова. М., 2009.
7. Гусаров Д.А., Гусарова В.Д., Михалев А.В., Ласман В.А., Баирамашвили Д.И., Миронов А.Ф., Сенаторова Н.К., Сенаторов А.В. / Биоорг.Хим. 2009. Т.35. №1. С.55-61.
8. Гусарова В.Д., Гусаров Д.А., Шепель Е.Н., Михалев А.В., Ласман В.А. / Биофармацевтический Журнал. 2009. Т.1. №1. С.28-33.
9. Dixon H.B., Perham R.N. / Biochem. J. 1968. V.109. P.312-314.
10. Shetty J.K., Kinsella J.E. / Biochem. J. 1980. V.191. P.269-272.
11. Mossavarali S., Hosseinkhani S., Ranjbar B., Miroliaei M. / International Journal of Biological Macromolecules. 2006. V.39. P.192-196.
12. Sangeetha K., Abraham T.E. / Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 2006. V.38. P.171-177.
13. Некипелова В.О., Гусаров Д.А., Ласман В.А., Баирамашвили Д.И., Миронов А.Ф., Швец В.И. / Биотехнология. 2009. №3. С.49-53.
14. Gusarov D., Nekipelova V., Gusarova V., Lasman V., Bayramashvili D. / J. Chromatogr. B. 2009. V.877. P.1216-1220.