Открытый доступ Открытый доступ  Закрытый доступ Доступ платный или только для подписчиков

Разработка методики пептидного картирования для оценки подлинности рекомбинантного интерферона бета-1b

Евгения Олеговна Голощапова, А. С. Минеро, О. Б. Рунова, О. Б. Устинникова

Аннотация


DOI: 10.30906/2073-8099-2021-13-1-21-26

Подобраны условия ферментативного гидролиза с применением эндопротеиназы Glu-C, рабочая область рН которой соответствовала рН-диапазону стабильности белка. Экспериментально подтверждено отсутствие аутогидролиза фермента. Анализ полученных пептидных карт, основанный на оценке стабильности времен удерживания и интенсивности 7 основных пиков, позволил выбрать их в качестве реперных. Масс-спектрометрический анализ состава фракций, соответствующих данным пикам, позволил идентифицировать 81 аминокислотный остаток, что соответствует 50 % аминокислотного покрытия первичной последовательности исходной молекулы. Разработана методика пептидного картирования с последующим разделением продуктов ферментативного гидролиза методом ВЭЖХ. Полученные результаты свидетельствуют о специфичности и стабильности полученных пептидных карт. Методика может быть использована при подтверждении подлинности структуры рекомбинантного интерферона бета-1b, не содержащего вспомогательных веществ белковой природы.


Ключевые слова


Рекомбинантный интерферон бета-1b; подлинность; пептидное картирование; высокоэффективная жидкостная хроматография

Ссылки


Hecker M., Aktas O., Wagner T., Rommer P. S. Interferon ?-1a and ?-1b for patients with multiple sclerosis: updates to current knowledge / Expert. Rev. Clin. Immunol. 2018. V. 14. No. 2. Р. 137 – 153.

Adams A., Tyor W., Holden K. Interferon beta-1b and childhood multiple sclerosis / Pediatr. Neurol. 1999. V. 21. No. 1. Р. 481 – 483.

Попова Е. В., Бойко А. Н., Быкова О. В. Опыт применения российского биоаналога интерферона бета-1b в лечении детского рассеянного склероза / Журн. неврол. и психиатр. 2016. № 6. С. 73 – 75.

EMA/CHMP/BMWP/652000/2010 Guideline on similar biological medicinal products containing interferon beta.

Directive 75/318/EEC.

Голощапова Е. О., Рунова О. Б., Устинникова О. Б. Рекомбинантные интерфероны бета-1а и бета-1b: особенности структуры белка и проблемные вопросы подтверждения ее подлинности / Хим.-фарм. журн. 2019. Т. 52. № 8. С. 61 – 64.

EMA, directive 75/318/EEC Production and Quality control of medicinal products derived by recombinant DNA technology.

USP Biotechnology-derived articles — peptide map¬ping.

EP 01/2010:20255 Peptide mapping.

ГФ XIV ОФС 1.7.1.0007.15 Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК.

Европейская фармакопея. Монография 07/2015:1110 Interferon Alfa-2 Concentrated Solution.

Williams K. R., Stone K. L. Enzymatic cleavage and HPLC peptide mapping of proteins / Mol. Biotechnol. 1997. V. 8. Р. 155 – 167.


Полный текст: PDF

Ссылки

  • Ссылки не определены.


** ** ** ** ** **

ISSN: 2073-8099

** ** ** ** ** **

 

Подписаться на наши издания Вы можете через почтовые каталоги агентства «Роспечать» и Объединенный каталог «Пресса России», а также на сайтах агентств «УП Урал Пресс», «Информнаука», «Прессинформ» и «Профиздат».